锐赛生物

RNAi病毒包装及挑选

package virus

尝试道理

与化学分解的siRNA和shRNA质粒载体比拟，操纵慢病毒或腺病毒抒发shRNA，一方面可用于传染依托传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞，进步shRNA导入细胞的效力，另外一方面病毒介导可耽误RNAi的时候，特别慢病毒传染后能够整合到宿主细胞基因组，停止稳转挑选。

图2.4慢病毒介导RNAi道理表示图

手艺利用

手艺利用基因功效的体表里研讨

病理机制研讨

尝试流程

尝试功效展现

图 1 绝对定量 PCR 检测 3 组 shRNA 慢病毒传染组绝对阳性对比组目标基因的搅扰功效

TPOUBLESHOOTING

罕见题目 FAQ

Q：化学分解siRNA，shRNA质粒和shRNA病毒停止细胞尝试的优错误谬误？

Q：我供给靶细胞为甚么需停止预尝试？需检测哪些内容？

A：客户供给的靶细胞停止培育后肯定其状况，咱们会停止靶基因的抒发品貌检测，确认靶基因的抒发量，而后接纳慢病毒或腺病毒停止细胞的 MOI 值试探，确认靶细胞用何种病毒估计接纳多大的病毒量停止传染尝试。若预尝试功效标明细胞脱靶基因的本底抒发本身很低则不倡议停止搅扰挑选任务。

Q ：病毒介导的RNAi挑选任务公司作何保障？

A：起首预尝试试探客户供给靶细胞的 MOI 值，传染效力到达 80% 以上，从而肯定病毒的包装范例。而后设想三个搅扰靶点并停止病毒包装任务，传染靶细胞后，咱们经由过程 qPCR 检测，确保最少一个靶点的搅扰功效大于80%。尝试竣事后最好搅扰靶点的腺病毒可按照客户的请求停止扩增；最好搅扰靶点的慢病毒能够按照客户的请求大批包装后供给给客户。

参考文献

1. Buchschacher GL Jr, Wong-staal F. Development of Lentiviral Vectors for Gene Therapy for Human Diseases.Blood2000,95(8):2499-2504.