锐赛生物

miRNA的抒发载体构建

vector construction

尝试道理

miRNA是在真核生物中发明的具备调控功效的内源性非编码RNA，巨细约20~25个核苷酸。咱们按照成熟miRNA序列信息，分解含有茎环布局的前体miRNA毗连至含侧翼序列的抒发载体中(见图6.1），将其转染/病毒包装传染进入细胞后，由II型启动子（CMV）启动抒发，经核酸酶的剪切加工，组装RNA引诱的缄默复合体，经由进程碱基互补配对的体例辨认靶mRNA，并按照互补程度的差别指点缄默复合体降解靶mRNA或隔绝靶mRNA的翻译。

图6.1miRNA抒发载体表示图

手艺利用

经由进程过抒发miRNA研讨其功效并停止靶点挑选的前期研讨任务

尝试流程

尝试功效展现

图1 miRNA 慢病毒包装尝试功效
A：miRNA 慢病毒抒发载体测序功效；B：miRNA 慢病毒传染 293 细胞照片。

TROUBLESHOOTING

罕见题目FAQ

Q ：为甚么挑选贵公司停止miRNA的抒发载体构建任务？

A：咱们供给miRNA抒发载体构建，能够在每步操纵为您把关：Oligo片断经PAGE纯化，品质良好，保障无碱基渐变的环境；在载体构建和测序考证进程中操纵经历丰硕，能够疾速为您构建好所需的miRNA抒发载体。

Q：甚么是miRNA mimics, miRNA inhibitor?其利用有哪些？

A：miRNA mimics:应用化学分解的体例，摹拟生物体内源的miRNA，特同性加强内源型miRNA的功效。

miRNA inhibitor：化学润色的特地针对细胞中特异的靶miRNA的按捺剂，可特异高效的按捺生物体内源性miRNA的活性。

以上化学分解片断获得便利快速，短时候内能够转染细胞，增添或按捺miRNA的活性，检测miRNA所调理的基因抒发和对旌旗灯号通路的影响，对说明miRNA在诸如细胞发育、增值、分解和凋亡中的机理有主要意思。

Q：miRNA抒发载体绝对化学分解的miRNA mimics的上风有哪些？

A：miRNA抒发载体绝对化学分解miRNA能够停止质粒扩增、抽提，转染细胞或包装慢病毒传染细胞后，抒发时长高于miRNA mimics，并且后续能够停止稳转株的构建任务；别的miRNA抒发载体含GFP荧光标记，抒发荧光加倍不变，便利停止转染或传染后的示踪。

参考文献

1. Ambros V.MicroR NAs: Tiny R egulators with Great Potential. Cell 2001;107(7):823-826.

2. Ambros V.The functions of animal micro R NAs.Nature 2004;431(7006):350-355.

3. Bartel DP.MicroR NAs:genomics,biogenesis, mechanism, and function.Cell 2004;116(2):281-297.