锐赛生物

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接洽德律风:

021-80158420

miRNA的抒发载体构建

vector construction



尝试道理


miRNA是在真核生物中发明的具备调控功效的内源性非编码RNA,巨细约20~25个核苷酸。咱们按照成熟miRNA序列信息,分解含有茎环布局的前体miRNA毗连至含侧翼序列的抒发载体中(见图6.1),将其转染/病毒包装传染进入细胞后,由II型启动子(CMV)启动抒发,经核酸酶的剪切加工,组装RNA引诱的缄默复合体,经由进程碱基互补配对的体例辨认靶mRNA,并按照互补程度的差别指点缄默复合体降解靶mRNA或隔绝靶mRNA的翻译。


图片4.png

图6.1miRNA抒发载体表示图


手艺利用


经由进程过抒发miRNA研讨其功效并停止靶点挑选的前期研讨任务


尝试流程




什物

数据信息

尝试周期

客户供给

miRNA序列信息

10周

咱们供给

miRNA抒发质粒/菌株、病毒液

根基尝试步骤、测序报告



尝试功效展现

图1 miRNA 慢病毒包装尝试功效
A:miRNA 慢病毒抒发载体测序功效;B:miRNA 慢病毒传染 293 细胞照片。


TROUBLESHOOTING


尝试题目

缘由

保举处置体例

miRNA过抒发质粒构建过程中未能挑选到阳性克隆?

试剂题目

注重OIigo片断的纯化级别、退火buffer、毗连酶体系、感触传染态细胞的效力等。

miRNA过抒发质粒测序失利?

发夹布局影响测序

改换手艺才能更好的测序公司。

miRNA过抒发质粒对细胞转染效力低?

转染前提不佳

接纳合适该细胞的转染试剂,优化转染前提。

细胞本身难转染

接纳病毒介导miRNA的过抒发。


罕见题目FAQ


Q :为甚么挑选贵公司停止miRNA的抒发载体构建任务?

A咱们供给miRNA抒发载体构建,能够在每步操纵为您把关:Oligo片断经PAGE纯化,品质良好,保障无碱基渐变的环境;在载体构建和测序考证进程中操纵经历丰硕,能够疾速为您构建好所需的miRNA抒发载体。


Q:甚么是miRNA mimics, miRNA inhibitor?其利用有哪些?

AmiRNA mimics:应用化学分解的体例,摹拟生物体内源的miRNA,特同性加强内源型miRNA的功效。

miRNA inhibitor:化学润色的特地针对细胞中特异的靶miRNA的按捺剂,可特异高效的按捺生物体内源性miRNA的活性。

以上化学分解片断获得便利快速,短时候内能够转染细胞,增添或按捺miRNA的活性,检测miRNA所调理的基因抒发和对旌旗灯号通路的影响,对说明miRNA在诸如细胞发育、增值、分解和凋亡中的机理有主要意思。


Q:miRNA抒发载体绝对化学分解的miRNA mimics的上风有哪些?

AmiRNA抒发载体绝对化学分解miRNA能够停止质粒扩增、抽提,转染细胞或包装慢病毒传染细胞后,抒发时长高于miRNA mimics,并且后续能够停止稳转株的构建任务;别的miRNA抒发载体含GFP荧光标记,抒发荧光加倍不变,便利停止转染或传染后的示踪。


参考文献

1. Ambros V.MicroR NAs: Tiny R egulators with Great Potential. Cell 2001;107(7):823-826.

2. Ambros V.The functions of animal micro R NAs.Nature 2004;431(7006):350-355.

3. Bartel DP.MicroR NAs:genomics,biogenesis, mechanism, and function.Cell 2004;116(2):281-297.

 
 
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