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卵白质免疫积淀

CO-IP



尝试道理


免疫共积淀(Co-Immunoprecipitation)因此抗体和抗原之间的专注性感化为根本的用于研讨卵白质彼此感化的典范体例。是肯定两种卵白质在完全细胞内生感性彼此感化的有用体例。

其道理是:当细胞在非变性前提下被裂解时,完全细胞内存在的很多卵白质-卵白质间的彼此感化被保留了上去。若是用卵白质X的抗体免疫积淀X,那末与X在体内连系的卵白质Y也能积淀上去。今朝多用精制的prorein A事后连系固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反映后,beads上的prorein A就能够吸附抗原到达精制的方针。这类体例经常利用于测定两种方针卵白质是不是在体内连系;也可用于肯定一种特定卵白质的新的感化同伴。

其长处为:(1)彼此感化的卵白质都是经翻译后润色的,处于自然状况;(2)卵白的彼此感化是在自然状况下停止的,能够防止报酬的影响;(3)能够分手获得自然状况的彼此感化卵白复合物。错误谬误为:(1)能够检测不到低亲和力和刹时的卵白质-卵白质彼此感化;(2)两种卵白质的连系能够不是间接连系,而能够有圈外人在中间起桥梁感化;(3)必须在尝试前展望方针卵白是甚么,以挑选最初检测的抗体,以是,若展望不准确,尝试就得不到功效,体例本身具备冒险性。

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办事流程

  1. 样本总卵白提取及与特定抗体反映

  2. 用Protein A/G捕获特定的抗体-卵白复合物

  3. 洗濯去掉未被捕获的卵白,获得纯卵白抗体复合物

  4. 经由过程Western-Blot检测IP功效

  5. 数据处置及Figure建造


尝试功效展现

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客户供给(尝试方针:研讨Protein A与Protein B是不是连系)

  1. 方针卵白信息(Protein A、Protein B)

  2. 需检测的细胞样品(Protein A、Protein B都可抒发,可不需阳性样)

  3. 合用于IP的一抗(Protein A)及其申明书

  4. 合用于Western Blot的一抗(Protein B)及其申明书


咱们供给

  1. 原始数据、功效图片

  2. 规范尝试报告

  3. SCI规范Result Figure

 
 
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