锐赛生物

快乐飞艇怎么看走势:靶标发明与功效考证快乐飞艇怎么看走势:基因操纵和基因组编辑药物靶标开辟快乐飞艇怎么看走势:生化/细胞程度考证高通量高内在阐发快乐飞艇怎么看走势:GPCR/核受体检测激酶检测体外药理学体外宁静性评估药代能源学毒理学评估快乐飞艇怎么看走势:药代能源学/毒理学抗肿瘤药理评估快乐飞艇怎么看走势:代谢类和心脑血管疾病药理评估快乐飞艇怎么看走势:中枢神经体系药理评估快乐飞艇怎么看走势:炎症/本身免疫疾病药理评估体内药理学立项功效展现快乐飞艇怎么看走势:肿瘤特性化医治名目QPCRWB检测ELISA检测甲基化检测SNP检测快乐飞艇怎么看走势:高效液相色谱法(HPLC)卵白质谱基因芯片快乐飞艇怎么看走势:核酸、卵白阐发办事快乐飞艇怎么看走势:目标基因的ORF克隆化学分解质粒载体构建快乐飞艇怎么看走势:siRNA的细胞转染及挑选手艺办事快乐飞艇怎么看走势:shRNA载体构建及挑选手艺办事快乐飞艇怎么看走势:RNAi病毒包装及挑选手艺办事快乐飞艇怎么看走势:miRNA的抒发载体构建及病毒包装快乐飞艇怎么看走势:载体构建及挑选办事chipchip-seqIPCO-IP快乐飞艇怎么看走势:RNA免疫共积淀(RIP)快乐飞艇怎么看走势:RNA pull down快乐飞艇怎么看走势:免疫共积淀尝试办事慢病毒包装腺病毒包装细胞培育原代细胞分手干细胞引诱分解CCK-8检测流式周期检测流式凋亡检测流式分选细胞快乐飞艇怎么看走势:流式判定细胞外表抗体快乐飞艇怎么看走势:活性氧(ROS)检测线粒体膜电位检测快乐飞艇怎么看走势:transwell检测管腔构成尝试细胞黏附尝试细胞克隆构成尝试细胞免疫荧光检测稳转株构建双荧光素酶检测细胞干性成球才能磁珠分选细胞快乐飞艇怎么看走势:MDA(丙二醛)检测酶活能源学检测HDA检测细胞尝试办事惯例化学染色快乐飞艇怎么看走势:免疫组化(IHC)免疫荧光(IF)快乐飞艇怎么看走势:原位杂交(ISH)快乐飞艇怎么看走势:荧光原位杂交(FISH)快乐飞艇怎么看走势:原位结尾标记染色(TUNEL)构造样本处置摄影处置病理学检测办事快乐飞艇怎么看走势:裸鼠皮下成瘤(CDX模子)快乐飞艇怎么看走势:人源肿瘤移植模子(PDX模子)糖尿病/瘦削模子血汗管类疾病模子肾脏疾病模子肝脏疾病模子快乐飞艇怎么看走势:炎症与本身免疫疾病模子呼吸体系疾病模子其余疾病模子植物尝试办事快乐飞艇怎么看走势:2019佳构SCI快乐飞艇怎么看走势:2018佳构SCI快乐飞艇怎么看走势:2017佳构SCI往期佳构SCI精选SCI案例库科研转化功效快乐飞艇怎么看走势:u.cad癌症筛查检测快乐飞艇怎么看走势:全外显子组基因检测其余疾病基因检测快乐飞艇怎么看走势:生物信息数据阐发办事快乐飞艇怎么看走势:肿瘤学范畴研讨平台病理学中间尝试室快乐飞艇怎么看走势:血汗管与代谢范畴疾病研讨平台快乐飞艇怎么看走势:炎症与本身免疫疾病范畴研讨平台快乐飞艇怎么看走势:特发肺纤维化疾病范畴研讨平台快乐飞艇怎么看走势:抗体药物一体化临床前研发平台药性评估平台公司消息代价金字塔三元悖论为客户博得声誉营业招商诚觅英才外部保举插手咱们留言板接洽咱们保举伴侣快乐飞艇怎么看走势:SCI论文颁发嘉奖轨制科研帮助快乐飞艇怎么看走势:POLOdeliverer3000CCK-8快乐飞艇怎么看走势:Annexin V-FITC快乐飞艇怎么看走势:Annexin V-RFPECL 发光液快乐飞艇怎么看走势:细胞周期与凋亡检测自研试剂快乐飞艇怎么看走势:基因质粒病毒收费送细胞库植物饲料促销勾当

临床医学立异,转化造福患者

植物尝试、载体构建、细胞尝试、病理学检测、免疫积淀、核酸卵白阐发

接洽德律风:

021-80158420

流式凋亡检测

apoptosis detection



尝试道理


细胞凋亡(Cell apoptosis)是指为保持内环境不变,由基因节制的细胞自立的有序的灭亡。细胞凋亡与细胞坏死差别,细胞凋亡不是一件主动的进程,而是主动进程,它触及一系列基因的激活、抒发和调控等的感化,它并不是病理前提下的毁伤,而是为更好地顺应保管环境而主动争夺的一种灭亡进程。

细胞凋亡检测的体例良多,咱们接纳的Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡的道理:磷脂酰丝氨酸(Phosphatidyl serine, PS)一般位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的初期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的外表,裸露在细胞外环境中。Annexin-V是一种份子量为35~36KD的Ca2+依靠性磷脂连系卵白,能与PS高亲和力特同性连系。将Annexin-V停止EGFP融会、荧光素(FITC、PE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针。(以下图7.4所示)。


7.4 Annexinv检测细胞凋亡的道理


碘化丙啶(Propidine lodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过完全的细胞膜,但可进入凋亡中初期的细胞和死细胞,而使细胞核红染。Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡,能够将凋亡初期的细胞和凋亡初期和死细胞辨别开。


手艺利用


细胞凋亡研讨不只遭到根本医学界的正视,也日趋遭到临床医学范畴的喜爱。经由进程检测药物、基因或卵白对细胞凋亡及凋亡调控基因的影响,在肿瘤防治、老年聪慧、艾滋病、本身免疫病,心肌堵塞等研讨上都阐扬着主动的感化。


尝试流程




什物

数据信息

尝试周期

客户供给

细胞株(冻存株或培育细胞)

及所需药品

细胞培育信息和药物处置体例

3周

咱们供给

残剩药物

根基尝试步骤、细胞培育照片、

流式上机图片、数据阐发功效


尝试功效展现


图1 接纳流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡


TROUBLESHOOTING

尝试题目

缘由

保举处置体例

空缺细胞凋亡率高?

操纵不妥

操纵举措柔柔,收完样后尽快上机。

检测试剂量过大,旌旗灯号过强

下降试剂用量。

接纳Annexin V/PI双染

法检测凋亡引诱后的阳

性对比样本凋亡率偏低?

试剂盒过时

4℃保管时候不要跨越半年。

荧光淬灭

操纵进程中注重避光,加完染料以后最初在2h内检测。

抛弃细胞培育上清

细胞培育上清中含有漂泊细胞,抛弃后构成凋亡比例偏低。


罕见题目FAQ


Q :经常利用的细胞凋亡的检测品种有哪些?

A :凋亡检测体例稀有十种之多,首要能够分为以下几大类: 1) DNA程度,检测凋亡时基因组DNA的变更; 2)卵白程度,首要检测凋亡时线粒体和灭亡受体两大凋亡通路的变更; 3)细胞膜/细胞器膜程度,首要检测凋亡时细胞膜成份或膜电位的变更; 4)超微布局,首要检测凋亡时亚细胞布局的变更。这些体例各有优错误谬误,必须连系具体的尝试目标,尝试前提和尝试处置来挑选适合的阐发手腕。


Q :罕见的细胞亡检测体例及优错误谬误比拟?

体例

长处

错误谬误

Anexin VPI双染法:

Annexin v可连系凋亡细胞外翻的PS

卵白。

能够精确的停止凋亡细胞的计数。

反映终了后需在一小时内检测,贴壁细胞奏乐处置要柔柔,避免机器毁伤对尝试功效的影响。不能用于构造样本。

Sub G1 峰检测:

凋亡细胞DNA含量的流式细胞打算阐发,阐发DBA亚二倍体的构成及细胞周期的变更。

合用性广,操纵便利。

对尝试操纵及尝试功效的阐发才能请求较高。不能用于构造样本。

TUNRL法:

染色体DNA双链断裂或单链断裂而产

生大批的粘性3‘ -OH结尾,可在脱氧

核糖核苷酸结尾转移酶(TdT)的感化

下,对DNA的3’ 结尾停止荧光剂标记。

原位染色,能精确地反映细胞凋亡典范的生归天学和形状特点,出格合用于构造样本的凋亡研讨。

操纵请求高,构造样本须要牢固,牢固体例不好能够致使背景高、旌旗灯号弱。

Caspase等凋亡通路卵白的WB检测:未活化前以酶原情势存在于胞浆中,在凋亡的初期阶段被剪切激活,可裂解响应的胞浆、胞核底物,终究致使细胞凋亡。

WB检测便利快速,尝试功效绝对直观,可停止半定量检测。

注重采办品质好的抗体并优化检测前提。


Q: Annexin V/PI双染尝试的四个象限别离代表甚么?


PI

Annexin V

代表细胞群

LL象限

-

-

一般细胞

LR象限

-

+

初期凋亡细胞

UR象限

+

+

初期凋亡细胞或好事细胞


UL象限

+

-

现实上不会呈现细胞;若呈现有能够是操纵进程中遭到侵害的细胞或是FACS仪器参数设置不妥


A:按照费光环境别离四个象限(见图7.6) ,横坐标代表绿色光(Annexin V为FITC绿色光标记),纵坐标代表Pl白色荧光,四个象限别离定名为LL, LR, UR, UL,因为Pl不能穿过未凋亡细胞和凋亡初期细胞的细胞膜,而Annexin V能够检测到凋亡初期外翻的PS,是以四个象限代表了差别的细胞群。

图片1.png

图7.6流式四象限图


Q:流式上机检测细胞亡每次所须要的细胞量大要是几多?

A:细胞接种到6孔板中停止后期药物处置/转染/传染后备用。对个别比拟大的细胞,根据现实细胞密度,利用150pxt培育血培育细胞,终究停止检测需10^5-10^6个细胞。


参考文献

1. Vermes I, C, Steffens-Nakken H,et al. A novel assay for apoptosis. FIow cytometric detection ofphosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V. J Immunol Methods 1995,184(1):39-51.

2. K o o pman G, Reutelingsperger CP, Kuijten GA, et al . Annexin V for flow cytometric of phosphatidylserineexpression on B cells undergoing apoptosis. BIood 1994, 84(5):1415-1420.

 
 
 任务时候
周一至周五 :9:00-18:00
 接洽体例
客服热线:18721441876
客服热线:15821758660
邮箱:service@gzjlmodel.com
注:不必QQ的可点击微信或网页右边在线征询
微信征询

微信征询

副标题

 
 
 
 

微信1.jpg


         

孔雀乐园app快乐飞艇破解 快乐飞艇稳赢图片 快乐飞艇主管18113牛x 企鹅乐园快乐飞艇骗局有托吗 快乐赛车走势图 快乐飞艇最佳打法 快乐飞艇规律技巧 快乐飞艇单双公式 快乐飞艇软件 快乐飞艇平台号码麦